柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50PSI（3.3Bar）之間（在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的）。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。

 

1、壓力過高

 

   這是液相在使用中zui常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。

(1)首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。

處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查；

 

(2)打開Purge閥，使流動相不經(jīng)過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。

處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI(6.7Bar)以下，過濾白頭正常，在檢查；

 

(3)把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。

處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞，則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。

 

2、壓力過低

 

   壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個原因就是泵里進(jìn)了空氣，但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴(yán)重一點會導(dǎo)致泵無法吸上液體。

 

   處理方法：打開Purge閥，用3-5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。